豬硫酸肝素糖蛋白（HSPG）ELISA試劑盒 返回列表頁

中文名稱：豬硫酸肝素糖蛋白(HSPG)ELISA試劑盒

英文簡稱：Procine HSPG ELISA Kit

檢測樣本：血清、血漿、細胞上清液、組織勻漿及相關生物液體

血清：不含抗凝劑的/含促凝劑。（通常為紅色、黃色、橘色管蓋的）

血漿：含抗凝劑。（通常為綠色、紫色管蓋的 ）

樣品收集后若在1周內(nèi)進行檢測可保存于2-8℃，若不能及時檢測，請按一次使用量分裝，凍存于-20℃(1個月內(nèi)檢測)，或-80℃(3個月內(nèi)檢測)，避免反復凍融。在檢測前，冷凍過的樣本應緩慢地融化并離心除去凍融過程產(chǎn)生的沉淀物。

雖然 ELISA 的操作步驟是相同的，但每次實驗的各種影響因數(shù)都是有所變化的，所以每次實驗時必須重新制作標準曲線，以便得到更準確可靠的檢測結(jié)果。如果需要做多次實驗，溶解后的高濃度標準品可以分裝保存于-20℃，避免反復凍融，有效期內(nèi)用掉。  

ELISA 實驗通常以細胞培養(yǎng)上清液、血清、血漿以及組織裂解物等為樣品。該實驗三種試劑：固相的抗原或抗體；酶標記的抗原或抗體；酶作用的底物。根據(jù)樣品的性質(zhì)、檢測的實驗條件、試劑的來源，可設計出不同類型的ELISA檢測方法。

一、直接ELISA

   原理：將抗原與固相載體連接，洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì)。加酶標抗體進行孵育。固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結(jié)合。*洗滌未結(jié)合的酶標抗體。此時固相上帶有的酶量與標本中受檢抗原的量相關。加底物反應。直接法主要用于測定抗原。

   優(yōu)點：操作流程簡短，實驗步驟少；無需使用二抗，避免了交叉反應；實驗步驟少，操作不易出錯。

   缺點：實驗中的一抗需要直接用酶標記，成本相對較高。

二、間接法ELISA

    原理：將抗原與固相載體相連結(jié)，形成固相抗原。洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì)。加入特異性一抗與固相抗原相結(jié)合，形成固相抗原抗體復合物。經(jīng)洗滌后，加酶標二抗。固相免疫復合物中的抗體與酶標二抗結(jié)合，從而間接地標記上酶。洗滌后，加底物顯色。

   優(yōu)點：酶標二抗可加強信號，提高靈敏度；靈活性更大，同一酶標二抗可應用于多種不同的一抗；不直標一抗，可保留更多的免疫反應性；成本更低，使用標記抗體更少。

   缺點：交叉反應幾率升高。

三、雙抗夾心法ELISA

   原理：雙抗體夾心法適用于測定二價或二價以上的大分子，但不適用于小分子抗原。將特異性抗體（捕獲抗體）與固相載體連接，形成固相抗體。洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。加入待檢樣品，保溫孵育。樣品中的特異性抗原與固相抗體結(jié)合，形成固相抗原抗體復合物。洗滌除去其他未結(jié)合物質(zhì)。加酶標抗體（檢測抗體）保溫孵育。固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結(jié)合。*洗滌未結(jié)合的酶標抗體。加底物反應。

雙抗原夾心法測抗體的反應模式與測抗原相似，用特異性抗原進行包被和制備酶結(jié)合物，以檢測相應的抗體。

   優(yōu)點：高特異性，使用的捕獲抗體與檢測抗體都是檢測特異性的；適用于復雜樣品，抗原不需要進行純化即可用于檢測；靈活性更大，靈敏度更高，可采用直接法也可采用間接法。
  缺點：檢測物需要擁有兩個以上不同的抗原表位或多個相同的重復表位；不適用于檢測小分子物質(zhì)。

四、競爭法ELISA

   原理：競爭法ELISA為復雜，通常用于檢測小分子如半抗原、激素、藥物等。樣品中待檢游離抗原與固定于固相載體上的抗原一起競爭相同的有*抗體，當樣品中的游離抗原越多，就可結(jié)合越多的抗體，而固相抗原只能結(jié)合較少的抗體。反之亦然。經(jīng)洗滌去除樣品中的抗原與抗體的結(jié)合物，只留下固相抗原與抗體的結(jié)合物。顯示經(jīng)計算可得樣品中抗原的含量。競爭法可根據(jù)實驗設置直接法、間接法或夾心法形式。

洗板方法（ Washing Techniques）
任何一個成功的ELISA檢測，正確的洗板方法是非常關鍵和重要的一方面。連貫的洗板也是很有必要的。在稀釋濃縮洗滌液時，請使用去離子水或者蒸餾水。

◆ 洗滌瓶或多通道移液器
保證洗瓶內(nèi)壓強良好或者移液器的管頭被適當調(diào)整并且無碎屑。檢查板內(nèi)的板條是否安放完好。將板條編號以防在傾泄的時候松動便于調(diào)整。首先，傾泄酶標板以清空內(nèi)容物。根據(jù)試劑盒內(nèi)推薦的體積向每孔內(nèi)滴加洗液。若實驗步驟中要求浸泡，則定時將每孔浸泡*。將板內(nèi)液體傾倒*，用干凈紙巾擦拭。按照說明書所示重復以上步驟。后一次洗板之后，將板內(nèi)液體傾倒*，用干凈紙巾拍打表面并擦干。切勿讓孔內(nèi)干燥。按照試劑盒內(nèi)說明書
迅速進行下一步實驗操作。
◆ 自動洗板儀
將自動洗板儀接入適當真空（根據(jù)制造商的說明）。確保每管都被適當抽吸。首先，通過抽吸或者傾倒將板清空。根據(jù)試劑盒內(nèi)推薦的體積向每孔內(nèi)滴加洗液。若實驗步驟中要求浸泡，則定時將每孔浸泡*。*抽吸各孔，保證沒有洗液殘留。在孔內(nèi)液體被*抽走之后不要再將裝置至于孔內(nèi)過分抽吸。按照說明書所示重復以上步驟。后一次洗板之后，將板內(nèi)液體傾倒*，用干凈紙巾拍打表面并擦干。切勿讓孔內(nèi)干燥。按照試劑盒內(nèi)說明書迅速進行下一步實驗操作。

友情提醒：                                        

試劑盒使用完畢后，請妥善處理相關耗材，避免環(huán)境污染！