豬核因子κB抑制蛋白α（IKBα）ELISA試劑盒 返回列表頁

中文名稱：豬核因子κB抑制蛋白α(IKBα)ELISA試劑盒

英文簡稱：Procine IKBα ELISA Kit

檢測樣本：血清、血漿、細(xì)胞上清液、組織勻漿及相關(guān)生物液體

血清：不含抗凝劑的/含促凝劑。（通常為紅色、黃色、橘色管蓋的）

血漿：含抗凝劑。（通常為綠色、紫色管蓋的 ）

樣品收集后若在1周內(nèi)進(jìn)行檢測可保存于2-8℃，若不能及時(shí)檢測，請(qǐng)按一次使用量分裝，凍存于-20℃(1個(gè)月內(nèi)檢測)，或-80℃(3個(gè)月內(nèi)檢測)，避免反復(fù)凍融。在檢測前，冷凍過的樣本應(yīng)緩慢地融化并離心除去凍融過程產(chǎn)生的沉淀物。

雖然 ELISA 的操作步驟是相同的，但每次實(shí)驗(yàn)的各種影響因數(shù)都是有所變化的，所以每次實(shí)驗(yàn)時(shí)必須重新制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，以便得到更準(zhǔn)確可靠的檢測結(jié)果。如果需要做多次實(shí)驗(yàn)，溶解后的高濃度標(biāo)準(zhǔn)品可以分裝保存于-20℃，避免反復(fù)凍融，有效期內(nèi)用掉。  

ELISA 實(shí)驗(yàn)通常以細(xì)胞培養(yǎng)上清液、血清、血漿以及組織裂解物等為樣品。該實(shí)驗(yàn)三種試劑：固相的抗原或抗體；酶標(biāo)記的抗原或抗體；酶作用的底物。根據(jù)樣品的性質(zhì)、檢測的實(shí)驗(yàn)條件、試劑的來源，可設(shè)計(jì)出不同類型的ELISA檢測方法。

一、直接ELISA

   原理：將抗原與固相載體連接，洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì)。加酶標(biāo)抗體進(jìn)行孵育。固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。*洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。此時(shí)固相上帶有的酶量與標(biāo)本中受檢抗原的量相關(guān)。加底物反應(yīng)。直接法主要用于測定抗原。

   優(yōu)點(diǎn)：操作流程簡短，實(shí)驗(yàn)步驟少；無需使用二抗，避免了交叉反應(yīng)；實(shí)驗(yàn)步驟少，操作不易出錯(cuò)。

   缺點(diǎn)：實(shí)驗(yàn)中的一抗需要直接用酶標(biāo)記，成本相對(duì)較高。

二、間接法ELISA

    原理：將抗原與固相載體相連結(jié)，形成固相抗原。洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì)。加入特異性一抗與固相抗原相結(jié)合，形成固相抗原抗體復(fù)合物。經(jīng)洗滌后，加酶標(biāo)二抗。固相免疫復(fù)合物中的抗體與酶標(biāo)二抗結(jié)合，從而間接地標(biāo)記上酶。洗滌后，加底物顯色。

   優(yōu)點(diǎn)：酶標(biāo)二抗可加強(qiáng)信號(hào)，提高靈敏度；靈活性更大，同一酶標(biāo)二抗可應(yīng)用于多種不同的一抗；不直標(biāo)一抗，可保留更多的免疫反應(yīng)性；成本更低，使用標(biāo)記抗體更少。

   缺點(diǎn)：交叉反應(yīng)幾率升高。

三、雙抗夾心法ELISA

   原理：雙抗體夾心法適用于測定二價(jià)或二價(jià)以上的大分子，但不適用于小分子抗原。將特異性抗體（捕獲抗體）與固相載體連接，形成固相抗體。洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。加入待檢樣品，保溫孵育。樣品中的特異性抗原與固相抗體結(jié)合，形成固相抗原抗體復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合物質(zhì)。加酶標(biāo)抗體（檢測抗體）保溫孵育。固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。*洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。加底物反應(yīng)。

雙抗原夾心法測抗體的反應(yīng)模式與測抗原相似，用特異性抗原進(jìn)行包被和制備酶結(jié)合物，以檢測相應(yīng)的抗體。

   優(yōu)點(diǎn)：高特異性，使用的捕獲抗體與檢測抗體都是檢測特異性的；適用于復(fù)雜樣品，抗原不需要進(jìn)行純化即可用于檢測；靈活性更大，靈敏度更高，可采用直接法也可采用間接法。
  缺點(diǎn)：檢測物需要擁有兩個(gè)以上不同的抗原表位或多個(gè)相同的重復(fù)表位；不適用于檢測小分子物質(zhì)。

四、競爭法ELISA

   原理：競爭法ELISA為復(fù)雜，通常用于檢測小分子如半抗原、激素、藥物等。樣品中待檢游離抗原與固定于固相載體上的抗原一起競爭相同的有*抗體，當(dāng)樣品中的游離抗原越多，就可結(jié)合越多的抗體，而固相抗原只能結(jié)合較少的抗體。反之亦然。經(jīng)洗滌去除樣品中的抗原與抗體的結(jié)合物，只留下固相抗原與抗體的結(jié)合物。顯示經(jīng)計(jì)算可得樣品中抗原的含量。競爭法可根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)置直接法、間接法或夾心法形式。

洗板方法（ Washing Techniques）
任何一個(gè)成功的ELISA檢測，正確的洗板方法是非常關(guān)鍵和重要的一方面。連貫的洗板也是很有必要的。在稀釋濃縮洗滌液時(shí)，請(qǐng)使用去離子水或者蒸餾水。

◆ 洗滌瓶或多通道移液器
保證洗瓶內(nèi)壓強(qiáng)良好或者移液器的管頭被適當(dāng)調(diào)整并且無碎屑。檢查板內(nèi)的板條是否安放完好。將板條編號(hào)以防在傾泄的時(shí)候松動(dòng)便于調(diào)整。首先，傾泄酶標(biāo)板以清空內(nèi)容物。根據(jù)試劑盒內(nèi)推薦的體積向每孔內(nèi)滴加洗液。若實(shí)驗(yàn)步驟中要求浸泡，則定時(shí)將每孔浸泡*。將板內(nèi)液體傾倒*，用干凈紙巾擦拭。按照說明書所示重復(fù)以上步驟。后一次洗板之后，將板內(nèi)液體傾倒*，用干凈紙巾拍打表面并擦干。切勿讓孔內(nèi)干燥。按照試劑盒內(nèi)說明書
迅速進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)操作。
◆ 自動(dòng)洗板儀
將自動(dòng)洗板儀接入適當(dāng)真空（根據(jù)制造商的說明）。確保每管都被適當(dāng)抽吸。首先，通過抽吸或者傾倒將板清空。根據(jù)試劑盒內(nèi)推薦的體積向每孔內(nèi)滴加洗液。若實(shí)驗(yàn)步驟中要求浸泡，則定時(shí)將每孔浸泡*。*抽吸各孔，保證沒有洗液殘留。在孔內(nèi)液體被*抽走之后不要再將裝置至于孔內(nèi)過分抽吸。按照說明書所示重復(fù)以上步驟。后一次洗板之后，將板內(nèi)液體傾倒*，用干凈紙巾拍打表面并擦干。切勿讓孔內(nèi)干燥。按照試劑盒內(nèi)說明書迅速進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)操作。

友情提醒：                                        

試劑盒使用完畢后，請(qǐng)妥善處理相關(guān)耗材，避免環(huán)境污染！