那些年，我們一起追過的WB實驗，總是因為環(huán)節(jié)多、耗時長讓實驗室的達人們頭疼不已。雖然天天做Western blot，但不是忙上一天zui后看不清條帶，就是條帶清晰了樣品間差異很難重復。今天就讓我們來看看如何追到WB實驗這位高冷范兒的沈佳宜。

Westernblot的困惑

• Westernblot環(huán)節(jié)多、耗時長，即便是同一樣品跑同一塊膠，zui終條帶間灰度差異也高達10%。雖然天天做Western blot，但不是忙上一天zui后看不清條帶，就是條帶清晰了樣品間差異很難重復。
• 不知道曝光多久？不知道顯影多久合適？定量結果不確定？結果無法重現(xiàn)？

哥家AWB真身

    GE的Amersham WB system （AWB）集成了的Western blot實驗流程，從電泳、轉印、印跡到zui終成像分析功能，讓以往手工作坊式的WB自動化、快速化和標準化，大大減少實驗中的差異，帶來一致的、定量的蛋白質分析結果。這臺*一體化的系統(tǒng)由哥家位于瑞典烏普薩拉的蛋白科學中心實驗室研發(fā)，于2014年底上市后便已助力了CancerCell文獻。

    AWB由主機、軟件和專屬耗材組成。主機包括兩部分：電泳與成像單元和印跡與孵育單元。

    AWB系統(tǒng)可以保證Westernblot實驗在4小時之內完成，而無需一整天的漫長等待。

AWB重新定義實驗步驟

    *步：電泳 

    在這一步中，我們使用恒定溫度、高度均一的電流裝置，配合質量穩(wěn)定的高分辨率預制膠和無液體的緩沖液條，將時間由2小時節(jié)省到42分鐘，也讓電泳步驟的波動降到zui低。電泳一旦到達檢測前沿，電泳自動停止并成像評估。

    第二步：轉印 

    從制作三明治，到蛋白質從凝膠轉移到膜上，所有關鍵的參數(shù)和組件都經過標準化，有利于帶來*的結果和zui低的背景。AWB PVDF卡設計巧妙，可避免用戶誤操作，而濾紙也已經切好，配合轉印架的設計，減少出錯的可能。在關閉轉印架時，內置的滾筒可以去除氣泡，增加重現(xiàn)性。內置的冷卻也能保持恒定的溫度，避免過熱。

    第三步：孵育 

    大家都知道，抗體孵育這一步是多么的瑣碎和煩心，守在小搖床邊等待與換液，消耗了大量的時間。AWB可以做我們的換液機器人，設置好程序即可放心走開，而孵育的程序總是可控，不用擔心人工情況下這次孵育時間長了信號強那次洗滌液加少了背景高。  

    第4步：檢測和成像 

    低熒光背景的PVDF卡，經過優(yōu)化的熒光標記試劑，以及高性能的激光掃描儀，這些帶來了高質量的定量數(shù)據(jù)。因此，我們可以靈敏檢測蛋白豐度的微小變化，分離和比較磷酸化與非磷酸化蛋白，并在同一塊印跡上準確測定高豐度和低豐度蛋白。

    第5步：分析

    對于數(shù)據(jù)分析而言，軟件的方便好用至關重要。掃描一結束，AWB軟件自動開展數(shù)據(jù)分析，通過柱狀圖、泳道圖和表格顯示關鍵信息。它能顯示所選擇泳道和條帶檢測結果，定量目標蛋白相對雜質的百分比，并利用總蛋白或內參蛋白來歸一化目標蛋白的信號，滿足科學界對WB結果越來越重視的定量化要求。

AWB的*之處

    標準化

    預制膠的使用避免了的凝膠質量的不穩(wěn)定，實驗的參數(shù)化和程序化避免了人為因素的不穩(wěn)定，以總蛋白作內參結合熒光技術避免了結果分析的不穩(wěn)定。

    快速化

    我們僅花了4小時便完成了WB實驗，提高了實驗室的工作效率和競爭力。

    自動化

    我們只需要做少量的準備工作便可做甩手掌柜，讓手機上的Watch app來提醒。

從此，我們不再擔心Westernblot的結果像*了。通過這臺智能的儀器、專屬的耗材和精心優(yōu)化的實驗方案，可以獲得更加定量、更容易重現(xiàn)的Westernblot數(shù)據(jù)。這樣，就能少一些重復，少一些優(yōu)化，也少一些troubleshooting。幫助實驗達人們追到WB實驗這位高冷范兒的沈佳宜。